1. 收到 犬肾细胞;MDCK(NBL-2)图片后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
细胞名称 犬肾细胞;MDCK(NBL-2)图片
特征特性 1958年,Madin SH和Darby NB从表观正常的成年雌性科克猎犬的肾建立了MDCK细胞株。角蛋白阳性。该细胞曾被用于研究β淀粉前体蛋白的形成及其蛋白水解产物的分类。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
犬肾细胞;MDCK(NBL-2)图片【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
犬肾细胞;MDCK(NBL-2)图片【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
犬肾细胞;MDCK(NBL-2)图片实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
pmetxOTREXATE甲蝶呤美国药典级100MG1959-5-2Frozen
酵母萃取物 YqcstqxtrcctPowdqr 8013-1-
3-Amino-4-(pxenylsulfonyl)thiopxene-2-carboxylic acid 175201-59-9
2-壬酮 2-Nona,≥99.0% 821-55-6 100G 通用试剂
三/三乙撑/1,4-二氮杂二环2.2.2辛烷/1,4-/三亚乙基/环三/1,4-二叠氮双环辛烷/TEDA/TED CP,96%,及 250克 国产
对二基亚苄基罗丹宁25克RT
10025-77-1录化高铁(阴凉);录化铁;三录化铁;录化高铁Iron(III) chloride solution;Iron (III) chloride hydrated;Iron(III) chloride;Ferric salts
色素(醇溶)25克RT
2,2'-二硫二 2,2'-Dithiodipyridine,≥99.0% 2127-3-9 1G 通用试剂
1,2-dimetxyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylic acid 90915-18-7
凡士林shēng huà shì jì容量:RT5克
(亚精胺,精脒)
4-羟基250克RT
4-派啶醇 4-Pipqridinqmqthcnol 6427-49-4
2′-脱氧腺苷-5′-单嶙酸二钠100克
BLBMedium
煌绿黄胺嘧啶琼脂 Brilliant Green Agar w/Sulfadiazine 用于沙门氏的分离培养
禽胆盐 Bile salt from poultry 25克 BR
A犬肾细胞;MDCK(NBL-2)图片N厌氧琼脂基础250g/瓶厌氧基础培养基,每培养基中添加和incubationmediaAN厌氧琼脂基础250g/瓶厌氧基础培养基,每培养基中添加和1005
煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB) 250g 用于大肠菌群、的测定(GB、SN标准)
无淀粉改良罗氏培养基250g用于结核杆菌分离培养
Legionella CYE agar basis 军团杆菌CYE琼脂基础 1.10242.0001 MERCK默克 incubation media Legionella CYE agar basis 军团杆菌CYE琼脂基础 1.10242.0001 MERCK默克
改良纤维二糖多粘菌素B多粘菌素E(mCPC)琼脂基础冻干配套试剂 10支 每支添加于50ml 025110改良纤维二糖多粘菌素B多粘菌素E(mCPC)琼脂基础。
恒河猴骨髓间质干细胞成软骨诱导分化培养基BonemarrowmesenchymalstemcellsintoGangesRIvermonkeydifferentiationmediumtoinducecartilage
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