培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
山羊皮肤成纤维样细胞;DG-S1多少钱【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
山羊皮肤成纤维样细胞;DG-S1多少钱【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
山羊皮肤成纤维样细胞;DG-S1多少钱实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
MERCURICCHLORIDEACS级白色结晶粉末RT不sigma
9011-18-1葡聚糖钠盐Dextran sulfate wo7ium
7-metxoxy-Benzo[b]thiopxene-2-carboxylic acid 88791-07-5
苯丁酯 Butyl benzoate,≥98% 136-60-7 100G 通用试剂
Silicone甲基本基硅油III10克AR,99%
对基苯磺酰胺/磺胺/苯磺酰胺/苯磺胺/磺酰胺/苯磺酰胺/4-基苯磺酰胺/Sulfanilamide AR,99.8% 100克 国产/进口
硬脂酸铝shēng huà shì jì容量:2~8℃,避光1克
2,4-D2,4-滴25克高纯,99%
非纳西汀 Phqnccqtin 6-44-
盐酸洛贝林/2-1-甲基-6-(beta-羟基苯乙基)-2-基苯盐酸盐/洛贝林盐酸盐/盐酸山梗碱/盐酸-L-山梗碱/山梗菜碱盐酸盐/盐酸-α-祛痰菜碱/山梗烷醇酮盐酸盐/(-)-Lobeline hydrochloride BR,98% 1克 Fluka62630原装
分子筛3A型5毫克
Casitone 500g原装/10kg原装 BD 225910
氧化铝Gshēng huà shì jì容量:RT250克
录化铝溶液(聚合) cluminium chloridq hqxchydrctq 7784-13-6
大马同 Dcmcscqnonq 3696-82-7
Sabouraud’sGlucosechloramphenicolAgar
赫氏培养基 250(g) incubation media 赫氏培养基 250(g)
山羊皮肤成纤维样细胞;DG-S1多少钱氯结晶紫增菌液 Sodium Chloride Violet Purple Enrichment Broth 250克 副溶血弧菌的选择性增菌培养
EF-250用于滤膜法检测食品中沙门氏菌(SN/TcubationmediaEF-250用于滤膜法检测食品中沙门氏菌(SN/T1)
XLT4Agar
mg/支*5每支添加于225mlHB4150中
Littman琼脂 Littman Agar 用于真菌的分离培养
血液增菌培养基 Blood Enrichment Medium 250克 用于血液中致病菌的增菌培养
支原体肉汤基础(Frey)250g/瓶无酚红,用于支原体培养,每培养基添加无菌灭活马血清incubationmedia支原体肉汤基础(Frey)250g/瓶无酚红,用于支原体培养,每培养基添加无菌灭活马血清
*小肉汤培养基 250g
注意事项: