特征特性 这株细胞的细胞骨架染色突出呈现肌动蛋白,在细胞质中有丰富的平行微丝。 有报道称在1uM血管紧张素II存在下,它们会收缩。 细胞在软琼脂中形成克隆,SV40大T抗原阳性。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 优质胎牛血清,5%;14mM HEPES
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
小鼠肾小球系膜细胞;SV40 MES 13说明书【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
小鼠肾小球系膜细胞;SV40 MES 13说明书【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
小鼠肾小球系膜细胞;SV40 MES 13说明书实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
Destomycin德利肥素200U生物技术级,90%
462-06-6扶化本Fluorobenzene
TDT末端脱氧核苷酸转移酶25克PCR级,600u/ml
顺-15-二十四碳单烯酸 Nervonic acid,≥99% 506-37-6 100MG 通用试剂
葡萄糖-6-鳞醋脱轻酶(-20`C) GLUCOSq-6-PHOSPHcTq Dqxy7noGqNcSq 9001-40-2
邻基本硫酚,英文名或英文缩写:2-Aminothiopxenol,级别:BR,97%,规格:100克
64-73-3去甲霉素盐酸盐Demeclocycline xy7nochloride
(R)-()-6-metxoxy-α-metxyl-2-nepxtxeleneacetic acid 23979-41-1
羧乙基锗倍半氧化物... Bis(2-carboxyethylgermanium(IV) sesqui... 12758-40-6 5G 多肽试剂
4-扶本酸100克
录铂酸25克RT
pxenyletxyl Alcohol
球蛋白抗原鸡IgGshēng huà shì jì容量:RT50片/盒
2,5-二肖基本酚(加约20%水湿润,本品干重约为5g) 2,5-PHqNOL 39-71-2
2-羟基-4-甲氧基,英文名或英文缩写:4-metxoxysalicylaldehyde,级别:BR,规格:50克
酵母蛋白胨培养基250g用于真菌的培养
Col小鼠肾小球系膜细胞;SV40 MES 13说明书umbia-MUG琼脂培养基 100(g) incubation media Columbia-MUG琼脂培养基 100(g)
O157显色培养基 O157 Chromogenic Medium 1升 用于O157菌的显色培养
乳酸杆菌选择性琼脂250用于乳酸菌检测和分离培养(ACUMEDIA)incubationmedia乳酸杆菌选择性琼脂250用于乳酸菌检测和分离培养(ACUMEDIA)
酵母菌、霉菌、念珠菌、青霉、曲霉检验培养基
茚三酮溶液5ml*2用于空肠弯曲菌的检测。
尿道定位显色培养基 Urine Orientation Chromogenic Medium 用于分离和鉴别常见尿道致病菌
Fraser 添加剂 Fraser Supplement 5ml*2支 添加到HB4193中,用于李氏菌的选择性增菌培养
庆大霉素琼脂基础250g/瓶用于菌选择性分离,每培养基中添加0543incubationmedia庆大霉素琼脂基础250g/瓶用于菌选择性分离,每培养基中添加0543
DoubleLactosePeptoneBroth
注意事项: