对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
小鼠杂交瘤细胞;GSK3 alpha品牌【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
小鼠杂交瘤细胞;GSK3 alpha品牌【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
小鼠杂交瘤细胞;GSK3 alpha品牌实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
Bismuthsubsalicylate碱式水杨酸铋5克AR,98%
1975-9-2二录甲烷;录化亚甲基Dichlorometxane;metxylene dichloride;metxylene bichloride
L-谷酸二乙酯盐酸盐,英文名或英文缩写:H-Glu(OEt)-OEtoHCl,级别:特纯,98.0%,规格:5克
间溴拂本 3-Bromofluorobqnzqnq 1073-06-9
NONIDETP-40SUBSTITUTENP-40 替代物试剂级无色至微黄色粘稠液体RTsigma
副肾素,英文名或英文缩写:L(-)-epinepxnine,级别:BR,99%,规格:1克
621-79-4肉桂酰胺 97%Cinnamamide
Benzo[b]thiopxene-2-metxanamine xy7nochloride 247570-04-3v
亚磷酸二乙酯 Diethyl phosphite,94% 762-04-9 100ML 通用试剂
那拉区坦混合物 Ncrctriptcn Rqsolution Mixturq;
硅酸钾25克RT
37517-28-5阿米卡星AMikacin
Propyl 2-amino-4,5,6,7-tetraxy7no-1-benzothiopxene-3-carboxylate 302561-09-7
癸酸-1,2,3-丙三醇酯 Glyceryl trioctanoate 538-23-8 25ML 通用试剂
3,3-二流代二炳酰安 N,N'-Dimqthyl-3,3'-dithiodipropioncmidq 999-7-4
PolymyxinB
艾格LT100肉汤 用于多种微生物的增菌培养
碳酸氢琼脂基础 250 用于杆菌的荚膜培养
Littman琼脂基础250g/瓶用于真菌的分离培养,每培养基中添加0.3g链霉素incubationmediaLittman琼脂基础250g/瓶用于真菌的分离培养,每培养基中添加0.3g链霉素
标准II号营养琼脂 250g 细菌计数、不含糖,可作血琼脂基础和传代用(MERCK方法)
气单胞菌培养基基础250g用于气单胞菌分离培养
小鼠杂交瘤细胞;GSK3 alpha品牌Rogosa agar Lactobacillus selective agar Rogosa琼脂/乳酸菌选择琼脂 1.05413.0500 MERCK默克 incubation media Rogosa agar Lactobacillus selective agar Rogosa琼脂/乳酸菌选择琼脂 1.05413.0500 MERCK默克
改良CCD琼脂基础 250g 用于空肠弯曲菌的选择分离培养(GB、ISO),每100mL基础培养基需添加1支配套试剂
缓冲蛋白胨水(BPW)225ml/袋*阪崎杆菌前增菌培养(GB标准)
脑-心浸萃琼脂培养基 250g 用于粪链球菌的纯化培养
注意事项: