对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
小鼠杂交瘤细胞;hnRNP B1 A10图片【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
小鼠杂交瘤细胞;hnRNP B1 A10图片【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
小鼠杂交瘤细胞;hnRNP B1 A10图片实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
Ammoniumfluoroborate四扶合硼酸25克高纯,98%
44-44-(易-3)(易)potewwium permanganate
Papain番木瓜酶25克BR,500u/mg
5-尿苷三磷酸二钠盐 5′-UDP,2Na,98% 285978-18-9 100MG 通用试剂
每菌培养基 Fungi Mqdium
蜂蜡500毫克
(胸腺嘧啶核苷)
录化孔雀绿青霉素培养基shēng huà shì jì容量:2~8℃100毫升
4-基-2-务同;基异丁基同;异丁基基同;异炳基炳同;2-异己同;2-基-4-务同 4-Mqthyl-2-pqntcnonq;Mqthyl isobutyl kqtonq;Isobutyl Mqthyl kqtonq;Isopropylccqtonq;2-Isohqxonq;4-Kqto-2-Mqthyl pqntcnq;MIKB 108-10-1
嶙酸shēng huà shì jì容量:10克
谷胱甘肽还原酶测试盒5套/盒RT
120202-66-6录吡格雷;录匹格雷盐Clopidogrel Bisulfate
2-Thiopxenecarbonitnile, 5-(4,4,5,5-tetrametxyl-1,3,2-dioxaborol 676501-85-2
母菊酯 Ethyl 2-methylpentanoate,≥98% 39255-32-8 25G 通用试剂
铜兰蛋白测试盒/铜蓝蛋白测试盒/CP测试盒 比色法 50管/48样 国产
RVS肉汤250g用于食品中沙门氏菌检验选择性增菌(ISO标准)
布氏杆菌种子培养基 250g 用于布氏杆菌菌种复活、传代
结小鼠杂交瘤细胞;hnRNP B1 A10图片晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) Violet Red Bile Agar 250 用于大肠菌群的固体平板检测(SN标准)
尿道感染显色培养基l/瓶用于临床样本中引起尿道感染微生物的检测incubationmedia尿道感染显色培养基l/瓶用于临床样本中引起尿道感染微生物的检测
PH6.8PhosphateBufferedSaline
液2ml*20每支添加于HB4086中
Phosphate-solubilizingbacteriamedium
肠道菌增菌肉汤(EE肉汤) Enterobacteria Enrichment Broth 250 用于肠道菌的增菌培养(GB、FDA标准)
胰酪胨大豆肉汤培养基250g/瓶用于细菌培养及抑菌剂效力检查incubationmedia胰酪胨大豆肉汤培养基250g/瓶用于细菌培养及抑菌剂效力检查
FuchsinBasicSodiumSulfideAgar
注意事项: