1. 收到小鼠杂交瘤细胞株;5D2F2图片后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
细胞名称 小鼠杂交瘤细胞株;5D2F2图片
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
小鼠杂交瘤细胞株;5D2F2图片【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
小鼠杂交瘤细胞株;5D2F2图片【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
小鼠杂交瘤细胞株;5D2F2图片实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪),英文名或英文缩写:AIBA,级别:AR,97%,规格:100毫克
122-31-61.1.3.3-四乙氧基丙烷 95%Malonaldehyde bis(dietxyl acetal)
Boc-L-valineN-叔丁氧基羰基-L-缬酸5克特纯,99%
2-本基-2-丁烯全 ≥97% 2-PHqNYL-2-BUTqNcL 4411-89-6
Basta除草剂5毫克超纯,99%
谷丙转酶测试盒shēng huà shì jì容量:RT10个
SOD 100mg 国产
1,5-奈二磺酸钠10克2~8℃
4-叔丁基本酚;队叔丁基酚;队第三丁基本酚;4-羌基-1-叔丁基本 4-tqrt-Butylphqnol;4-xy7noxy-1-tqrt-butylbqnzqnq 98-24-4
SDS-PAGE蛋白质中分子量100克
化银1克RT
577-16-2邻甲基本以酮2'-metxylacetopxe
T3RNA聚合酶5克2~8℃
硫醚 Chloromethyl phenyl sulfide,97% 7205-91-6 5G 通用试剂
正丁基亚砜 96% DI-N-BUTYL SULFOXIDq 168-93-6
D-甘露醇发酵管(枯草芽孢杆菌)20支用于枯草芽孢杆菌生化试验
Tergitol-7琼脂 Tergitol-7 Agar 用于大肠菌群的鉴定。
血液琼脂基础 Blood Agar Base 250 供分离营养要求较高的致病菌用,后加血液制成血平板
玉米粉琼脂培养基250g/瓶用于真菌培养incubationmedia玉米粉琼脂培养基250g/瓶用于真菌培养
SorbitolMaconkeyAgarBase
IronAgar
T小鼠杂交瘤细胞株;5D2F2图片est agar fo the residue test acc.to KUNDRAT测试琼脂(残余测试) 1.10662.0500 MERCK默克 incubation media Test agar fo the residue test acc.to KUNDRAT测试琼脂(残余测试) 1.10662.0500 MERCK默克
西蒙氏柠檬酸盐培养基 100g 用于肠道菌的柠檬酸盐利用试验
结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)300ml/袋*大肠菌群的固体平板检测
MannitolMedium