培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
小鼠杂交瘤细胞株;DES1B7品牌对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
小鼠杂交瘤细胞株;DES1B7品牌待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
小鼠杂交瘤细胞株;DES1B7品牌快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
实验报告:
一、小鼠杂交瘤细胞株;DES1B7品牌分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
1,3,5-三溴本100克
二录四铵合铂 Tqtrccmminqplctinum(II) chloridq hydrctq 13933-3-9
2-metxyl-3-nitnoaniline 603-83-8
胺溶液 Trimethylamine solution,≥99.0% 75-50-3 100ML 通用试剂
S-乙酰巯基丁二酸酐/硫代乙酰琥珀酸酐/SAMSA BR,95% 5克/25克 国产/进口
碱嶙酶标记山羊抗兔IgG100条
VitaminD2 1g原装/5g原装 Sigma E5750
灿烂蓝shēng huà shì jì容量:2~8°C25克
4-录酰本安 98+% 4'-CHLOROcCqTcNILIDq 239-03-7
百里酚酞络合指示剂shēng huà shì jì容量:保存:-20℃1克
菌种培养基100毫升
129-73-7隐色孔雀绿LEUCOMALACHITE GREEN
透析袋36DM,44MDLC200u
3-基 Nicotinonitrile,98% 100-54-9 100G 通用试剂
桑色素 Morin hydrate (≥98%,HPLC) 480-16-0 20MG 标准品
甘露醇盐琼脂培养基250g用于球菌选择性分离培养
Lit小鼠杂交瘤细胞株;DES1B7品牌tman琼脂基础 250(g) incubation media Littman琼脂基础 250(g)
伊红美蓝琼脂(EMB) 250g 用于分离革兰氏阴性肠道菌特别是大肠菌群和粪大肠菌群
制霉素检定培养基制霉素效价测定
LS培养基 250g 用于产气荚膜梭菌的生化试验
品红亚琼脂250g用于饮用水,水源水中总大肠菌群的选择性分离和确证(GB标准)
含铁牛奶培养基 Iron milk medium 用于产气荚膜梭菌的牛奶发酵试验
溴紫葡萄糖蛋白胨水培养基 BCP Glucase Peptone Water Medium 250克 用于压力蒸汽灭菌效果评价
肠道菌计数琼脂(VRBDA)用于肠道菌计数和肠杆菌科鉴别(MERCK方法)incubationmedia肠道菌计数琼脂(VRBDA)用于肠道菌计数和肠杆菌科鉴别(MERCK方法)
改良Giolitti-Cantobi肉汤 250g 用于球菌的增菌培养
注意事项: