小鼠杂交瘤细胞;IIID12-G7品牌对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
小鼠杂交瘤细胞;IIID12-G7品牌待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
小鼠杂交瘤细胞;IIID12-G7品牌快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
实验报告:
一、小鼠杂交瘤细胞;IIID12-G7品牌分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
2-酮戊二酸,英文名或英文缩写:α-Ketoglutaric acid,级别:BR,98%,规格:5克
582-52-51,2:5,6-O-双异丙叉-α-D-葡萄糖Dieetone-D-glucose
Bariumacetate醋酸钡5克CP,30%
2-亚肖基本 97% 2-nitnOSOTOLUqNq 611-3-4
Amikacin丁胺卡那霉素1克BR,98%
离析酶R-10,英文名或英文缩写:Macerozyme R-10,级别:BR,30u/mg,芬末,规格:5克
9002-18-0琼脂粉;琼脂;琼胶;洋菜Agar-Agar;Gelose;2X YT Agar;Agar;GuM agar
TEMED四甲基乙二安超纯级透明液体RTsigma
2,4-二 2,4-Difluoro,98% 1550-35-2 5G 通用试剂
奎宁/(8S,9R)-6-甲氧鸡纳-9-醇盐/奎宁盐/奎宁酯//金鸡纳盐/Quinine sulfate BR,98%, 25克 国产/进口
嶙酸锌shēng huà shì jì容量:RT25克
PVPP 25g/100g/500g/1kg原装 Sigma P6755
乙基纤维素500毫克
5-安基间本二加醋 5-cminoisophthclic ccid 99-31-0
L-胱酸二甲酯100克
Fraser肉汤增菌液FBSR0x5支试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB
DNase 琼脂 (CM0321) Oxoid incubation media DNase 琼脂 (CM0321) Oxoid
深黄被孢霉 模式菌株 支/瓶
小鼠杂交瘤细胞;IIID12-G7品牌去氧胆酸盐琼脂(DC)250g用于大肠菌群固体平板测定
Brothmedium
缓冲动力-盐培养基250g用于产气荚膜梭菌的动力和盐还原试验
卵磷脂吐温80营养琼脂 Lecithin Tween 80 Nutrient Agar 用于化妆品细菌总数测定(GB标准)
标准2号营养琼脂 Standard Ⅱ Nutrient Agar 250克 不含糖,可作血琼脂基础和传代用
m-TEC琼脂用于水中耐热细菌滤膜计数(Acumedia方法)incubationmediam-TEC琼脂用于水中耐热细菌滤膜计数(Acumedia方法)
尿素酶琼脂基础 250g 生化培养基,用于细菌脲酶检测(GB、SN标准)
注意事项: