特征特性 该细胞1958年由E.Y. Lasfargues 和 L. Ozzello 建系,源自一位74岁白人女性的乳腺癌组织。该细胞表达WNT3和WNT78。TNF alpha抑制该细胞生长。该细胞雌激素受体阴性,但表达5'外显子缺失的雌激素mRNA。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
人乳腺癌细胞;BT-20品牌对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
人乳腺癌细胞;BT-20品牌待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
人乳腺癌细胞;BT-20品牌快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:1.人乳腺癌细胞;BT-20品牌研究的对象是活细胞
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
实验报告:
一、人乳腺癌细胞;BT-20品牌分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
3-本酸shēng huà shì jì容量:2~8℃,避光25克
13770-61-1铟(阴凉)INDIUM nitnATE
苦酮酸shēng huà shì jì容量:2~8℃1克
2-甲氧基 2-Methoxy,99% 1993-4-9 25G 通用试剂
葡聚糖 T-2000 (右... Dextran T-2000 (分子量:2000,000) 9004-54-0 10G 分离试剂
化500克RT
22407-20-1别嘌醇相关物质BAllopurinol Related CoMpound B;5-(forMylaMino)-1H-pyrazole-4-carboxaMide
metxyl 2-amino-4-(4-isobutylpxenyl)thiopxene-3-carboxylate 350990-40-8
三反油酸甘油酯 Glyceryl trielaidate,≥99% 537-39-3 1G 通用试剂
N,N-二基三基硅安 N,N-Dimqthyltrimqthylsilylcminq 083-91-
加替沙星,英文名或英文缩写:Gatifloxacin,级别:USP级,60u/mg,规格:2KU
33403-97-3N-乙基-4-甲胺4-(etxylaminometxyl)pyridine
D(-)-2-基,英文名或英文缩写:D-2-Aminobutyric acid,级别:BR,99%,规格:25克
BCIP 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate d... 102185-33-1 100MG 通用试剂
杨梅苷 Myricetrin(,≥99%,HPLC) 17912-87-7 20MG 标准品
人乳腺癌细胞;BT-20品牌亚盐还原厌氧菌孢子液体培养基250g用于亚盐还原厌氧菌孢子的增菌培养。
PS琼脂 PS Agar 用于消化球菌的培养
叶酸测定培养基 Folic Acid Assay Medium 250 用于婴儿食品和乳粉中叶酸测定
酵母氮源基础(YNB)250g/瓶用于通过碳源的利用对酵母菌进行分类incubationmedia酵母氮源基础(YNB)250g/瓶用于通过碳源的利用对酵母菌进行分类
MPCAgarMedium
WSSalmonellaAgar
包姜氏琼脂培养基 250g 用于百日咳菌分离培养
尿道定位显色培养基 Urine Orientation Chromogenic Medium 1000ml 用于分离和鉴别常见尿道致病菌
incubationmedia
含225ml布氏肉汤均质袋 10个/包 用于空肠弯曲菌的前增菌
注意事项: