青色荧光蛋白标记人结直肠癌细胞;HCT116-CFP说明书对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
青色荧光蛋白标记人结直肠癌细胞;HCT116-CFP说明书待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
青色荧光蛋白标记人结直肠癌细胞;HCT116-CFP说明书快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
实验报告:
一、青色荧光蛋白标记人结直肠癌细胞;HCT116-CFP说明书分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
4-氢胺树脂1公斤
示蛋白胨NA
CHYMOSTATIN胰凝乳蛋白酶抑制剂蛋白组学级5MG9076-44-2Frozen
还原茚三酮 Hydrindantin dihydrate 5950-69-6 5G 通用试剂
金胺O/金丝雀黄O/盐基淡黄/碱性黄2/碱性嫩黄O/盐基槐黄/碱性槐黄/4,4-碳亚基双(N,N-)单盐酸盐/碱性淡黄O/盐酸基四甲基甲烷/金胺/金丝雀黄/奥黄/Ae O 高纯,70%, 25克 上海
茴香脑shēng huà shì jì容量:100克
2390-54-7硫代黄色素TThioflavine T
镍NTA琼脂糖凝胶6FFshēng huà shì jì容量:100毫克
3,3,5,5-四二苯二... Bis(3,5-dichlorophenyl) disulfide,97% 137897-99-5 5G 通用试剂
3.4-二轻 Dixy7nopyrcn 110-87-
间本二酸二烯丙酯5毫升保存:-20℃
四基脲;四本尿速;1,1,3,3-四基脲 TqtrcMqthylurqc;TMU;TqMur 80-70-6
4-etxylpxenylhydrezine xy7nochloride 53661-18-0
对叔丁基-4-苯 4′-tert-Butyl-4-chlorobutyrophe,98% 43076-61-5 25G 通用试剂
α-乙酸钾/1-乙酸钾/NAA-K BR,95%, 25克 国产/进口
GVPCLiquidMedium
O青色荧光蛋白标记人结直肠癌细胞;HCT116-CFP说明书GYE 选择添加剂 1.09877.0001 MERCK默克 incubation media OGYE 选择添加剂 1.09877.0001 MERCK默克
改良CCD琼脂配套试剂 10支/盒 每支添加于100ml(022212)中配成MLST
C57BL/6小鼠神经干细胞完全培养基CompleteculturemediumofneuralstemcellsinC57BL/6mice
Acetamidebroth
麦康凯肌醇阿东醇羧卞青霉素琼脂(MZAC)250g用于食品中克雷伯氏菌分离培养
显色培养基 用于鉴定和计数 1000ml incubation media 显色培养基 用于鉴定和计数 1000ml
抗辐射链霉菌 分离源:金针菇培养料。 支/瓶
无菌病毒运输液(VTM)3ml/支*36用于甲流病毒标本运送
哥伦比亚琼脂培养基(新药典) 250g 用于梭菌的选择性分离培养
注意事项: