培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 优质胎牛血清,10%
人食管癌细胞;JAR图片对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
人食管癌细胞;JAR图片待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
人食管癌细胞;JAR图片快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:1.人食管癌细胞;JAR图片研究的对象是活细胞
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
BOC-L-ThreonineN-叔丁氧羰基-L-苏酸5克BR,99%
2,8-二羌基-6-磺醋内 wo7ium 2,8-dixy7noxyncphclqnq-6-sulfonctq 6327-23-3
9-bromo-11,11-dimetxyl-11H-Benzo[a]fluorene 1198396-29-0
酚 Kaempferol,≥98%(HPLC) 520-18-3 20MG 标准品
DL-乳酸/乳酸/2-羟基丙酸/α-羟基丙酸/(±)-2-羟基丙酸/DL-α-羟基丙酸/DL-Lactic acid CP,85%,危害环境 500毫升 国产/进口
改良淋病奈瑟菌选择性琼脂平板shēng huà shì jì容量:1米
(蓝色葡聚糖2000)
二本胺磺酸钡10毫升2~8℃
糜蛋柏酶 ChyMotrypsin 9004-7-3
维生速C cscorbic ccid;VitcMin C 20-81-7
硅油shēng huà shì jì容量:25克
121-00-63-叔丁基-4-羟基茴香醚3-tert-Butyl-4-xy7noxyanisole
metxyl 2-amino-4-(4-metxoxypxenyl)-3-thiopxenecarboxylate 350988-34-0
三人食管癌细胞;JAR图片丙酸甘油酯 Tripropionin,≥97.0% 139-45-7 25G 通用试剂
正丁安;1-丁安;1-安基丁烷 n-ButylcMinq;1-cMinobutcnq 109-73-9
产品名称货号规格用途订购
YPD Broth-capsule 培养基 5capsules incubation media YPD Broth-capsule 培养基 5capsules
粘红酵母 模式菌株,产生纳朗果霉素 支/瓶
阪崎肠杆菌分离琼脂(ESIATM)250g用于阪崎肠杆菌分离培养
铁琼脂 250g 用于军团菌的选择性分离培养(ISO标准)
马铃薯葡萄糖半固体琼脂250g用于椰毒假单胞酵米面亚种的产毒培养
RVS肉汤 250(g) incubation media RVS肉汤 250(g)
3% NaC1乳糖发酵管 3% NaC1乳糖发酵管 20支 BR
绿脓菌素测定培养基(PDP)250用于绿脓杆菌的绿脓菌素测定试验(GB标准)incubationmedia绿脓菌素测定培养基(PDP)250用于绿脓杆菌的绿脓菌素测定试验(GB标准)
PrestonBrothBase
注意事项: