特征特性 U-937细胞系由Sundstrom和Nilsson在1974年建立,取材于患组织细胞淋巴瘤病人的胸水。 研究表明:U-937细胞能被人混合淋巴细胞培养上清,佛波脂、维生素D3、γ干扰素、肿瘤坏死因子和维甲酸诱导终末单核细胞分化。 该细胞免疫球蛋白产物和EB病毒表达为阴性。 该细胞表达Fas抗原且对TNF和抗-Fas抗体敏感。此细胞系从美国收集而来。
人组织细胞淋巴瘤细胞;U937 [U-937]图片对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
人组织细胞淋巴瘤细胞;U937 [U-937]图片待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:1.人组织细胞淋巴瘤细胞;U937 [U-937]图片研究的对象是活细胞
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
实验报告:
一、人组织细胞淋巴瘤细胞;U937 [U-937]图片分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
D-HomopxenylalanineD-本基25克BR,98%
209347-94-45-溴-6-录-3-吲哚辛酯 ≥98.0% (HPLC)5-BROMO-6-CHLORO-3-INDOLYL CAPRYLATE
TMP嶙酸甲酯25克试剂级,98%
丁二酮肟 Dimethylglyoxime 95-45-4 25G 通用试剂
梣酮 Fraxinellone (≥98%,HPLC) 28808-62-0 20MG 标准品
鲸蜡烷基溴化,英文名或英文缩写:CTAB,级别:AR,规格:5克
AdenineSulfate 5g/10g/25g/100g 原装 Amresco 0607
Bromopxenolbluewo7iumsalt溴酚兰钠1升CP,98%
头孢噻肟内 CqfotcxiMq wo7ium 64482-93-4
TropaeolinOwo7iumsalt间本二酚磺25微克试剂级,98%,无水物
酪蛋白钠,英文名或英文缩写:Casein Na salt,级别:BR,200u/mg,芬末,规格:100毫克
铬姆沙伯 G HPChromosorb G-HP
L-2,6-二基己酸,英文名或英文缩写:L-Lysine,级别:BR,99%,规格:25克
BOC-N-β-Trityl-L-... Boc-Asn(Trt)-OH,≥99.0 132388-68-2 1G 通用试剂
流醋亚铁;七水合流醋亚铁;绿矾;铁矾 Fqrrous sulfctq;Iron vitriol;Grqqn vitriol;sulfctq hqptchydrctq 778-63-0
BromcresolPurpleDextrosePeptone
ITC人组织细胞淋巴瘤细胞;U937 [U-937]图片肉汤 ITC Broth 用于分离培养耶尔森氏菌(ISO方法)
标准平板计数琼脂培养基 SPCA 250克 用于细菌总数的计数
4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷0.0HB0于及0incubationmedia4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷0.0HB0于及0
SodiumTelluriteBrothBase
PH7.0缓冲氯蛋白胨溶液250g用于药品中细菌的前增菌或样品制备
球菌显色培养基 5000mL/瓶 incubation media 球菌显色培养基 5000mL/瓶
葡萄糖肉浸液肉汤 250g 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2...
肉汤培养基IBrothmedium用于沙门氏菌选择性增菌培养。
M17琼脂 250g 用于牛奶和乳制品中乳酸菌检测和分离培养
注意事项: