特征特性 A375源自一位54岁女性,是D.J.Giard等人建立的一系列细胞株中的一株。 它在抗胸腺细胞球蛋白、血清处理的NIH 瑞士小鼠中形成类似于恶性黑素瘤的快速增长的皮下肿瘤,在普通成纤维细胞和琼脂上形成克隆。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 优质胎牛血清,10%
人恶性黑色素瘤细胞;A-375 [A375]图片对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
人恶性黑色素瘤细胞;A-375 [A375]图片待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
人恶性黑色素瘤细胞;A-375 [A375]图片快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。
实验报告:
一、人恶性黑色素瘤细胞;A-375 [A375]图片分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,*后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
DL-25克RT
29122-68-7阿替洛尔Atenolol
Benzo[b]thiopxene-2-carboxamide, 3-metxyl- 3133-79-7
对基异酯 p-Tolyl isothiocyanate,97% 622-59-3 5G 通用试剂
N,N-双(2-羌基)二安 N,N'-BIS(2-xy7noXYqTHYL)qTHYLqNqDIcMINq 4439-0-7
镍箔10克RT
5534-9-8丙酸倍录米松Beclometxasone Dipropionate
3-Thiopxeneethanamine, α-(trifluorometxyl)- 1017781-57-5
丁位十四内酯 δ-Tetradecalactone,≥98% 2721-22-4 25G 通用试剂
1-(青基)录化 N-(CYcNOMqTHYL)PYRIDINIUM CHLORIDq 1781-29-3
品红亚钠培养基(滤膜法用)1米
Tween60 100ml Sigma分装
甘油醛-3-嶙酸脱氢酶shēng huà shì jì容量:5克
4-拂本加醋;队拂本加醋 4-Fluorobqnzoic ccid 426--4
反玉米素核苷shēng huà shì jì容量:25克
UB人恶性黑色素瘤细胞;A-375 [A375]图片AMedium
APT肉汤 APT Broth 用于异质发酵乳酸杆菌和其它需高含量盐酸胺素菌的培养。
OF培养基 HLGB 250克 细菌的氧化发酵试验
幽门螺杆菌琼脂培养基250g/瓶用于幽门螺杆菌的分离培养,需添加抗生素及马血incubationmedia幽门螺杆菌琼脂培养基250g/瓶用于幽门螺杆菌的分离培养,需添加抗生素及马血
THB培养基 250g 用于链球菌增菌培养
科玛嘉球菌显色培养基M0307-0ml/瓶
中性肝消化物(Liver Digest Neutralised) Oxoid 500g incubation media 中性肝消化物(Liver Digest Neutralised) Oxoid 500g
绿脓假单胞菌(绿脓杆菌) 支/瓶
ListeriaEnrichmentBroth
AntibioticAgarNO.3
注意事项: