2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
LactoseBroth
T1N0肉汤 250(g) incubation media T1N0肉汤 250(g)
改良Frey氏培养基基础 Frey Medium Modified Base 250克 培养滑液支原体及其他禽支原体用
改良罗氏培养基基础250用于结核杆菌的培养、计数、保存、照光试验、药物敏感性测定及菌型鉴定等incubationmedia改良罗氏培养基基础250用于结核杆菌的培养、计数、保存、照光试验、药物敏感性测定及菌型鉴定等
DextroseCasein-peptoneAgar
DG-250g用于食品中和酵母菌分离培养(Acumedia方法)
TPGYT培养基基础 250(g) incubation media TPGYT培养基基础 250(g)
UVM添加剂 UVM Supplement 10毫升 添加到HB4195中,用于李氏菌的选择性增菌培养
SCHAEDLER琼脂250用于厌氧菌的分离培养(Acumedia方法)incubationmediaSCHAEDLER琼脂250用于厌氧菌的分离培养(Acumedia方法)
3%TSIAgar
霍乱双糖铁琼脂(KIA) 250 用于的生化试验(SN标准) incubation media 霍乱双糖铁琼脂(KIA) 250 用于的生化试验(SN标准)
T1N1 琼脂 250 用于的培养(SN标准) incubation media T1N1 琼脂 250 用于的培养(SN标准)
T1N0 肉汤 250 用于的生长试验(SN标准) incubation media T1N0 肉汤 250 用于的生长试验(SN标准)
T1N3 肉汤 250 用于的生长试验(SN标准) incubation media T1N3 肉汤 250 用于的生长试验(SN标准)
胚胎心肌组织来源细胞;CCC-HEH-2
大鼠肾系膜细胞;RMC
SERPINA1A Others Mouse 小鼠 Alpha 1 Aiypsin / SerpinA1a 细胞裂解液 (阳性对照)
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS2 细胞,HeLa 229细胞 EAC-E2G8细胞,鼠腹水瘤
胃粘膜上皮细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
POSTN Others Mouse 小鼠 POSTN / OSF2 细胞裂解液 (阳性对照)
鸡胚致死孤儿病毒探针法荧光定量PCR试剂盒实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。