一步法Western用封闭液

详细内容

Western Blot实验中，为防止印迹膜与检测系统中的蛋白成分(如抗体IgG等)发生非特异性吸附，导致实验结果不清晰，通常在进行一抗孵育需预先对印迹膜上的非特异结合位点进行封闭。本产品以奶粉为基础，采用独特配方，用于一步法WB检测中的封闭步骤，可快速高效地封闭膜上多余的结合部位，减少非特异结合情况的产生，降低背景，适用于各种转印膜的封闭，操作方便快捷。另外，本产品特别添加了蛋白稳定剂，可保证每次实验封闭效果稳定可靠。

注意事项：

1、每次使用时，必须保证封闭液将印迹膜完全浸没，以免影响封闭效果。

2、本产品含有防腐剂，操作时请佩戴手套进行防护。

3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：

1、本产品无需稀释，开盖即用。

2、目的蛋白转移完毕后，将印迹膜放入容器中，加入适量One Step Western Blocking Buffer。

3、室温孵育5分钟。

4、封闭结束后弃去封闭液，进行一步法Western Blot后续操作。

储存条件：2～8℃
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
化胆,从牛脂来(>98.0%(T))  Cholesteryl Bromide from Beef Fat  质量规格：>98.0%(T) 小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC7 ELISA Kit

胆壬酸酯(>89.0%(GC))  Cholesterol Pelargonate  质量规格：>89.0%(GC) 小鼠粘蛋白1(MUC1)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC1 ELISA Kit

胆壬基碳酸酯  Cholesterol Nonyl Carbonate  质量规格： 小鼠粘蛋白2(MUC2)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC2 ELISA Kit

胆庚基碳酸酯  Cholesterol Heptyl Carbonate  质量规格： 小鼠粘蛋白4(MUC4)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC4 ELISA Kit

胆油醇碳酸酯(>70.0%(HPLC))  Cholesterol Oleyl Carbonate  质量规格：>70.0%(HPLC) 小鼠粘蛋白5AC(MUC5AC)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC5AC ELISA Kit

胆甲基碳酸酯(>80.0%(GC))  Cholesterol Methyl Carbonate  质量规格：>80.0%(GC) 小鼠粘蛋白5B(MUC5B)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC5B ELISA Kit

胆乙基碳酸酯(>94.0%(GC))  Cholesterol Ethyl Carbonate  质量规格：>94.0%(GC) 小鼠长停滞特异性基因产物6(gas-6)ELISA试剂盒 ，英文名： gas-6 ELISA Kit

胆异丙基碳酸酯(>95.0%(GC))  Cholesterol Isopropyl Carbonate  质量规格：>95.0%(GC) 小鼠着丝粒蛋白H(CENPH)ELISA试剂盒 ，英文名： CENPH ELISA Kit

胆丁基碳酸酯  Cholesterol Butyl Carbonate  质量规格： 小鼠真核翻译起始因子2α激酶3(EIF2αK3)ELISA试剂盒 ，英文名： EIF2αK3 ELISA Kit

胆异丁基碳酸酯  Cholesterol Isobutyl Carbonate  质量规格： 小鼠整合素α1(ITGα1)ELISA试剂盒 ，英文名： ITGα1 ELISA Kit
小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA检测试剂盒MouseMucin-5subtypeAC,MUC5AC 96T/48T 氢化肉桂酸胆酯(>95.0%(GC))  Cholesterol Hydrocinnamate  质量规格：>95.0%(GC)

小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC5AC ELISA Kit 胆酯(>95.0%(GC))  Cholesterol Laurate  质量规格：>95.0%(GC)

小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC5B ELISA Kit 豆蔻酸胆酯(>98.0%(T))  Cholesterol Myristate  质量规格：>98.0%(T)

小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC7 ELISA Kit 化胆,从牛脂来(>98.0%(T))  Cholesteryl Bromide from Beef Fat  质量规格：>98.0%(T)

小鼠粘蛋白1(MUC1)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC1 ELISA Kit 胆壬酸酯(>89.0%(GC))  Cholesterol Pelargonate  质量规格：>89.0%(GC)

小鼠粘蛋白2(MUC2)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC2 ELISA Kit 胆壬基碳酸酯  Cholesterol Nonyl Carbonate  质量规格：

小鼠粘蛋白4(MUC4)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC4 ELISA Kit 胆庚基碳酸酯  Cholesterol Heptyl Carbonate  质量规格：

小鼠粘蛋白5AC(MUC5AC)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC5AC ELISA Kit 胆油醇碳酸酯(>70.0%(HPLC))  Cholesterol Oleyl Carbonate  质量规格：>70.0%(HPLC)

小鼠粘蛋白5B(MUC5B)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC5B ELISA Kit 胆甲基碳酸酯(>80.0%(GC))  Cholesterol Methyl Carbonate  质量规格：>80.0%(GC)

小鼠长停滞特异性基因产物6(gas-6)ELISA试剂盒 ，英文名： gas-6 ELISA Kit 胆乙基碳酸酯(>94.0%(GC))  Cholesterol Ethyl Carbonate  质量规格：>94.0%(GC)
一步法Western用封闭液人激肽释放酶8(KLK 8)试剂盒 Human Kallikrein 8,KLK 8 ELISA Kit 表熊果酸 HPLC≥98% 20mg

RatBrainderivedneuroophicfacor,BDNFELISAKit大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒规格：96T/48T 甲氧基＇羟基异黄酮OβD葡萄糖 HPLC≥98% 20mg

10%TWEEN20溶液100毫升 甲氧基葛根素 HPLC≥98% 10mg

MouseBonemorphogeneticprotein7,BMP-7ELISA试剂盒小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA试剂盒规格：96T/48T 羟基,二甲氧基紫檀烷；美迪紫檀素 HPLC≥98% 10mg

小鼠烟酸酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸(NAADP)ELISA试剂盒 ，英文名： NAADP ELISA Kit 羟基葛根素 HPLC≥98% 10mg

兔子促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA检测试剂盒rabbitadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit 96T/48T 羟基葛根素 HPLC≥98% 20mg

犬不对称二甲基精氨酸(ADMA)试剂盒 Dog asymmeical dimethylarginine,ADMA ELISA kit 羟基紫檀茋 HPLC≥98% 20mg

英文名称HumanGlycogenphosphorylaseBBELISAKit人糖原0酸化酶同工酶BB(GPBB)ELISA试剂盒规格：96T/48T 氧代乌索烷烯羧酸 HPLC≥98% 20mg

大米蛋白化学萃取试剂盒20(10克/) 乙酸南美楝属二醇酯 HPLC≥98% 10mg

RatLeptinSolubleReceptor,sLRELISA试剂盒大鼠可溶性瘦素受体(sLR)ELISA试剂盒规格：96T/48T 乙酰基乳香酸 HPLC≥98% 20mg

更新时间：2023/12/26 9:24:24

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