蛋白磷酸酶抑制剂混合液Ⅱ

详细内容

组织/细胞裂解时会释放出大量内源性蛋白磷酸酶，以各种方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化，导致不同于正常生理状态的差异，影响实验结果。因此，加入外源性蛋白磷酸酶抑制剂，抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，维持蛋白质的磷酸化状态，是Western Blotting、免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质和蛋白激酶活性测定等研究不可缺少的一步。本产品就是针对这一用途开发。

产品特点：

1. 即开即用，不需要单独购买每个成分然后再配制。

2. 由多种蛋白磷酸酶抑制剂组成，各成分的浓度经过精心优化。

3. 抑制谱广，能特异性地抑制酪氨酸磷酸酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶，大限度保持蛋白质磷酸化。

4.与各种动物细胞裂解液兼容。

5. 使用简单，在细胞裂解液中按一定比例加入即可(根据蛋白磷酸酶决定，一般按1/100的体积比)。

6.适用于Western blot、免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白激酶活性测定和信号传导等试验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1.在临用溶解本产品，并按1/100的比例加入到细胞裂解液中(1mL细胞裂解液中加入10μL)。注意：对蛋白磷酸酶含量特别丰富的组织，可以将加入比列提高到1/20-1/50。

2.后续动物细胞提取和蛋白组学处理按常规方法进行即可。

注意：避免反复冻融本产品，所以次溶化后，如果还有剩余，可将其分装成小份冻存，每次用多少取多少。
乙酸-1-萘酯(>98%,BR)质量规格：>98%,BR1-Naphthyl acetate  英文名称MouseCCL26ELISAKit小鼠CCL26规格：96T/48T  大鼠脂蛋脂酶A2(Lp-PLA2)ELISA试剂盒 ，英文名： Lp-PLA2 ELISA Kit

二十八烷醇(>98%,BR)质量规格：>98%,BR1-Octacosanol  冰冻切片组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒50  人抗皮肤抗体(ASA)ELISA检测试剂盒HumanAi-SkinAibody,ASAELISAKit 96T/48T

1-苯基-5-巯基四氮唑(>98.5%,BR)质量规格：>98.5%,BR1-Phenyl-1H-tetrazole-5-thiol  RatEotaxin1ELISA试剂盒大鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)ELISA试剂盒规格：96T/48T  大鼠白细胞抗原DR(HLA-DR)试剂盒 Rat leukocyte aigen-DR,HLA-DR ELISA kit

新戊二醇(>98%,BR)质量规格：>98%,BR2,2-Dimethyl-1,3-propanediol  小鼠白介素1β (IL-1β)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装  CLIAKitfoie-2ELISAKit大鼠含球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2规格：48T/96T
RatIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISA试剂盒大鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒规格：96T/48T  1617-53-4穗花杉双黄酮品牌  Amentoflavone

小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)ELISA试剂盒 ，英文名： IDO1 ELISA Kit  572-31-6黄杞苷规格  Engeletin

小鼠全段甲状旁腺素(i-PTH)ELISA检测试剂盒MouseiactParathormone,i-PTHELISAKit 96T/48T  57420-46-98-O-乙酰山栀苷甲酯厂家  8-O-Acetyl shanzhiside methyl ester

人结核菌杆抗体IgG(TB-Ab IgG)试剂盒 Human tuberculosis aibody IgG,TB-Ab IgG ELISA Kit  64421-28-9山栀苷甲酯说明书  Shanzhiside methylester

Ratai-gonadoopin-releasinghormonereceptoraibody,GHR-AbELISAKit大鼠促性腺激素释放激素受体抗体(GHR-Ab)ELISA试剂盒规格：96T/48T  27741-01-1京尼平苷酸品牌  Geniposidic acid
蛋白磷酸酶抑制剂混合液Ⅱ107912-97-0西伯利亚远志糖A5规格  Sibiricose A5  英文名称RatCTELISAKit大鼠降钙素(CT)规格：96T/48T

107912-97-0西伯利亚远志糖A5厂家  Sibiricose A5  英文名称RatCTELISAKit大鼠降钙素(CT)规格：96T/48T

107668-79-1草乌甲素说明书  Bulleyaconitine A   英文名称RatCrossLapsELISAKit大鼠骨原交联(CrossLaps)规格：96T/48T

107534-93-0安五脂素厂家  Anwuligan   英文名称RatCrossLapsELISAKit大鼠骨原交联(CrossLaps)规格：96T/48T

107438-79-9银杏内酯J品牌  Ginkgolide J  英文名称RatCRHELISAKit大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒规格：96T/48T
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

更新时间：2024/3/29 16:18:49

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