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点击次数:1012 发布时间:2022/3/11 9:11:34
One-Tube RT-PCR(一管式RT-PCR)区别于传统的两步法(逆转录和PCR扩增分两步完成),RNA模板逆转录和cDNA扩增在一个管内完成,大大降低了污染的风险、缩短了分析时间并且提高了反应的重复性。One-Tube RT-PCR采用优化的缓冲液体系,高纯度酶,无DNA、RNA残留,逆转录酶选用高活性M-MLV 逆转录酶(RNase H-),PCR扩增选用热启动高保真KOD酶,明显减少错配。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
Direct One Tube RT-PCR试剂盒 |
| 100次|500次 |
RT-PCR的产物可以通过琼脂糖凝胶电泳和EB染色进行分析,及下游的常规操作,如:限制性内切酶酶切、连接、DNA测序、dHPLC分析;或采用定量PCR仪进行qRT-PCR进行在线分析。
产品应用:
cDNA克隆(平末端连接、限制性酶切、琼脂糖凝胶电泳/EB染色、荧光毛细管电泳、DNA测序等);
特别适合RNA的qRT-PCR分析;
RNA病毒或者RNA样品的定量或半定量分析。
产品优势:
(1)无需分管,简单方便、降低污染风险、缩短分析时间;
(2)反应所需的酶及其他出buffer以外的试剂为预混Mix,保证用量的准确性、方便操作;
(3)高活性和高稳定性的逆转录酶和DNA聚合酶,保证反应的高灵敏度和高特异性;
(4)DNA聚合酶选用热启动KOD,保真性比Taq酶高20倍以上(产物适合平末端连接);
(5)特别适合RNA样品的定量或半定量分析。
保存条件:One-Tube RT-PCR kits可在-20℃下保存,有效期1年以上。
大鼠超敏热休克蛋白70(HSP-70)elisa分析检测试剂盒
大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)elisa分析检测试剂盒
大鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)elisa分析检测试剂盒
大鼠叉头框蛋白P3(FoxP3)elisa分析检测试剂盒
大鼠层粘连蛋白亚基γ-2(LAMC2)elisa分析检测试剂盒
大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶(ACP5)elisa检测试剂盒
大鼠抗存活素抗体(Anti-Surv)elisa检测试剂盒
大鼠聚集蛋白聚糖(AGC)elisa检测试剂盒
大鼠巨噬细胞炎性蛋白相关蛋白1(MRP1)elisa检测试剂盒
大鼠巨噬细胞炎性蛋白5(MIP5)elisa检测试剂盒
Direct One Tube RT-PCR试剂盒快速蛋白裂解液25ml
快速蛋白裂解液50ml
快速蛋白裂解液100ml
细菌裂解液(免超声)50ml
细菌裂解液(免超声)100ml
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2024/3/26 9:45:04
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