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点击次数:1035 发布时间:2022/3/3 9:47:48
胶板尺寸:9.8×8.4×0.41cm
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
核酸变性预制胶(15%,10wells) |
| 10块 |
凝胶尺寸:8.1×7.4×0.15cm
浓度:15%
孔数:10 wells
上样量:60μl
电泳缓冲液:1X TBE buffer
电泳条件:150V,50-75min
保存条件:4℃,有效期2个月
应用:合成寡核苷酸分析和纯化、RNA酶保护实验、体外转录研究和RNA印迹
大鼠Coronin-1A(Coro1a/Coro1)elisa检测试剂盒
大鼠c-jun elisa检测试剂盒
大鼠c-fos elisa检测试剂盒免费代测
大鼠CDP-甘油二酯--甘油-3-磷酸3磷脂酰转移酶,线粒体(PGS1)elisa检测试剂盒
大鼠CDCP1 elisa检测试剂盒
大鼠内毒素(ET)elisa检测试剂盒
大鼠内毒素(Endotoxin)elisa检测试剂盒
大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)elisa检测试剂盒
大鼠脑源性神经生长因子(BDNF)elisa检测试剂盒
大鼠脑钠肽体N末端片段(NT-proBNP)elisa检测试剂盒
核酸变性预制胶(15%,10wells)人G1/S特异性细胞周期蛋白E1(CCNE1)elisa分析检测试剂盒
人G1/S特异性细胞周期蛋白E1(CCNE1)elisa检测试剂盒
人GAD/IA2自身抗体elisa分析检测试剂盒
人GAD/IA2自身抗体elisa检测试剂盒
人GDP解离抑制因子2(GdI2)elisa分析检测试剂盒
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2024/4/7 10:07:29
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