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点击次数:1024 发布时间:2022/3/3 9:02:30
本DNA Marker是由λDNA经Hind III完全酶切后配制而成的。本制品浓度为50ng/μl,为预混1×Loading Buffer的DNA溶液,可直接电泳。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
λDNA/HindIII DNA Marker |
| 500μl(100次) |
片段组成:23130bp,9416bp,6557bp,4361bp,2322bp,2027bp,564bp,125bp。
缓冲液配方:10mM Tris-HCl,10mM EDTA,5% Glycerol,0.0025%溴酚蓝。
注意事项:
1、由λDNA经限制性内切酶消化制成的DNA Markers的原始末端之间经常由COS末端结合在一起,在电泳进行热处理(60℃,5分钟,冰上骤冷),能使Marker的电泳图像变得更为清晰。
2、以λ/Hind III DNA Marker为例,原始末端之间的COS末端的结合,影响23,130bp和4,361bp的DNA条带。如果电泳以后的图像中的4,361bp的DNA条带亮度低于比其小的DNA片段时,那说明COS末端的结合情况比较严重。
储存条件:-20℃,有效期2年。
大鼠Ⅰ型胶原交联氨基端肽(NTXⅠ)elisa检测试剂盒
大鼠Ⅰ型胶原α2(COL1α2)elisa检测试剂盒
大鼠Ⅰ型胶原α1(COL1α1)elisa检测试剂盒
大鼠Ⅰ型胶原(COL1)elisa检测试剂盒
大鼠90kDa热休克蛋白β1(HSP90β1)elisa检测试剂盒
大鼠克拉拉细胞蛋白(CC16)elisa检测试剂盒
大鼠可溶性肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(sTWEAK)elisa检测试剂盒
大鼠可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)elisa检测试剂盒
大鼠可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)elisa检测试剂盒
大鼠可溶性血纤蛋白单体复合物(SFMC)elisa检测试剂盒
λDNA/HindIII DNA Marker人CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)elisa分析检测试剂盒
人CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)elisa检测试剂盒
人CCAAT增强子结合蛋白δ(C/EBPδ)elisa分析检测试剂盒
人CCAAT增强子结合蛋白δ(C/EBPδ)elisa检测试剂盒
人CCAAT增强子结合蛋白ε(C/EBPε)elisa分析检测试剂盒
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2024/4/19 9:58:10
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