NadRed红色核酸染料

详细内容

NadRed红色核酸染料是一种EB (溴化乙锭)的升换代产品，用于凝胶中DNA、RNA等核酸的染色。NadRed具有安全(致突变性低且检测不到显著的细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点，凝胶中的核酸在使用本产品染色后用适当紫外灯(300nm左右波长)检测呈现红色荧光，适用于原先使用EB为染料的凝胶成像系统。

NadRed比EB和SYBR Green更安全。NadRed在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性。艾姆斯氏试验(Ames test)结果表明，NadRed的诱变性远小于EB。EB在多种致突变测试中呈现很强的诱变性，而NadRed仅仅在浓度高达20微克/毫升时，并在S9代谢活化时有非常微弱的诱变性。通常NadRed在凝胶中的工作浓度约为2微克/毫升，大大低于可导致诱变的浓度。NadRed和的另外一种安全型核酸染料NadGreen，由于它们特殊的化学结构使其难以进入细胞，从而大大降低甚至避免了染料的致突变性和细胞毒性。而SYBR Green染料可以穿透细胞膜，进入活细胞并染色DNA，并且有报道SYBR Green可以强烈增强紫外线诱导的基因突变。

NadRed的使用方法和EB一致。NadRed可以按适当比例直接加入琼脂糖中配制成凝胶，也可以在电泳完毕后对凝胶进行染色。者更加方便，而后者灵敏度要更高一些。但由于NadRed本身已经非常灵敏，通常采用把NadRed直接配制在凝胶中就可以了。对于一些特殊情况，如核酸样品量特别少的情况等，则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色。

本制品可室温保存，至少两年有效。

NadRed对于核酸的迁移率影响非常小，小于SYBR Green对于核酸迁移率的影响。

通过凝胶回收试剂盒或酚抽提，可以有效去除与DNA或RNA结合的NadRed，从而确保不会影响后续的连接、酶切、PCR、测序等常规的分子生物学用途。

注意事项：

制备好的NadRed琼脂糖凝胶，在4℃避光条件下通常可以保存3-5天。

NadRed琼脂糖凝胶再次熔化使用时，为取得更好的观察效果，需要添加适量NadRed。

电泳之后的凝胶不建议重复使用。

电泳后再使用NadRed染色的凝胶一般不需要脱色。如果发现背景太高，可以使用不含核酸酶的水进行脱色处理。

NadRed和NadGreen除了可以染色双链DNA外，也可染色单链DNA和RNA。NadRed对单链核酸的染色灵敏度约为对双链DNA染色灵敏度的一半。NadRed对单链核酸的染色灵敏度约为NadGreen的5倍。

如果使用聚丙烯酰胺凝胶，请使用浸泡染色法染胶，并延长染色时间至30分钟-1小时。

如果观察到条带弥散或者分离不理想，建议使用浸泡染色法染色以确认是否与染料有关。如果浸泡染色法染色后仍然出现类似的问题，说明与染料无关，请尝试以下方法：使用新鲜配制的电泳缓冲液、降低核酸的上样量、降低染料的浓度、降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、降低电泳电压一倍以上并延长凝胶电泳时间以改善电泳效果、使用更薄的梳齿等。

本产品兼容常用的电泳缓冲液，例如TAE和TBE。

NadRed不属于有毒有害物质，并通过了环境安全相关测试，相关废弃物无需特殊处理，可以参考常规化学试剂进行处理。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒

醇脱氢酶（ADH）测试盒

醇脱氢酶（ADH）测试盒

单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒

乙醛脱氢酶（ALDH）试剂盒
大鼠结蛋白(Des)elisa检测试剂盒

大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)elisa检测试剂盒

大鼠角化细胞生长因子(KGF)elisa检测试剂盒

大鼠角化细胞内分泌因子(KAF)/双调蛋白(AR)elisa检测试剂盒

大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)elisa检测试剂盒
NadRed红色核酸染料犬表面活性蛋白D(SP-D)elisa分析检测试剂盒

犬不对称二甲基精氨酸(ADMA)elisa分析检测试剂盒

犬成纤维细胞生长因子23(FGF23)elisa分析检测试剂盒

犬雌二醇(E2)elisa分析检测试剂盒

犬雌激素(E)elisa分析检测试剂盒

更新时间：2023/11/6 14:17:54

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