详细内容
本产品是一种经过改良的以LoadRed为染料的六倍浓缩的DNA上样缓冲液,颜色为鲜艳的红色,与DNA胶的对比非常鲜明,利于观察。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
DNA上样缓冲液(红色) | 6×LoadRed DNA loading buffer | 2mL|10mL |
背景资料:
常规的以溴酚蓝为指示剂的DNA缓冲液,由于溴酚蓝的电泳的位置与200~500bp的DNA的电泳位置相近,在EB染色观察200-500bpDNA时,溴酚蓝对这些DNA片段的观察有很强的干扰。特别是当这些小片段的量较少时,溴酚蓝甚至会把小片段DNA的信号全部遮盖掉。而LoadRed的电泳位置在相当于20~50bp的DNA片段。这样就可以完全消除染料对小片段DNA观察时的干扰。
产品组成:
组分 2mL
6×LoadRed DNA loading buffer 2×1mL
说明书 1份
保存:室温,有效期1年。
注意事项:
由于DNA的电泳操作会接触强致癌性的溴化乙锭(EB),因而LoadRed DNA上样缓冲液在长期使用的过程中易污染溴化乙锭,因此操作的时候请注意适当防护。
本产品仅限于业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
保幼激素3(JH3)含量测试盒
乙醇酸含量试剂盒
顺乌头酸含量试剂盒
阿魏酸含量试剂盒
乳酸含量试剂盒
大鼠降钙素原(PCT)elisa检测试剂盒
大鼠降钙素基因相关肽(CGRP)elisa检测试剂盒
大鼠降钙素(CT)elisa检测试剂盒
大鼠碱性磷酸酶(ALP)elisa检测试剂盒
大鼠碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)elisa检测试剂盒
DNA上样缓冲液(红色)犬γ氨基丁酸(GABA)elisa检测试剂盒
犬γ干扰素(IFN-γ)elisa分析检测试剂盒
犬γ干扰素(IFN-γ)elisa检测试剂盒免费代测
犬癌胚抗原(CEA)elisa分析检测试剂盒
犬癌胚抗原(CEA)elisa检测试剂盒
更新时间:2024/1/19 9:52:02
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