λDNA/HindIII(125～23130bp)

详细内容

本产品是由λDNA经HindIII完全酶切而成，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。产品浓度为0.1μg/μl，已含有1×loading buffer，可直接取2～5μL上样，使用方便。8条带的大小分别为125，564，2027，2322，4361，6557，9416，23130bp。

使用方法：

1.65℃加热5分钟，立即冰浴3分钟，取2～5μL本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中。

注：根据梳子的厚度和宽度进行上样。每1mm×1mm(厚度×宽度)加样孔上样1μL。窄齿梳子(一般为1mm×2mm)上样2μL；宽齿梳子(一般为1mm×5mm)上样5μL。如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子，可以适当调整上样量。

2.建议电泳条件：凝胶浓度为1.0％，凝胶长度10cm，电泳电压4-10v/cm，电泳时间45分钟。

3.通过EB染色后紫外灯下观察条带。

注意事项：

1.λDNA酶切Marker的末端容易由COS末端结合在一起，电泳65℃预热5分钟能解开结合的COS末端，得到更清晰的电泳图像。如果不预热，23130bp和4361bp会结合形成27491bp的额外片段，同时电泳后4361bp亮度会明显弱于其他片段。

2.琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。

3.请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。
MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 500T

微板比色法 1000T

CCK-8细胞活力检测试剂盒微板比色法 100T

凋亡细胞富集试剂盒 20T

Hoechst33342/PI双染试剂盒 100T
大鼠肌酸激酶同工酶MM(CK-MM)elisa分析检测试剂盒

大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)elisa分析检测试剂盒

大鼠肌酸激酶同工酶BB(CK-BB)elisa分析检测试剂盒

大鼠肌球蛋白(MYS)elisa分析检测试剂盒

大鼠肌红蛋白(MYO/MB)elisa分析检测试剂盒
λDNA/HindIII(125～23130bp)牛神经型一氧化氮合成酶(nNOS/NOS1)elisa分析检测试剂盒

牛肾上腺素(EPI)elisa分析检测试剂盒

牛肾上腺髓质素(ADM)elisa分析检测试剂盒

牛生长激素(GH)elisa分析检测试剂盒

牛生长激素释放多肽(GHRP)elisa分析检测试剂盒
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

更新时间：2023/12/20 9:32:00

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