详细内容
本品是EB的水溶液,浓度为10mg/ml。EB(溴化乙锭)能与核酸分子特异结合,用于观察琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶中DNA或RNA分子。广泛应用于核酸电泳后的染色以及流式细胞仪的样品染色处理等。溴化乙锭(Ethidium Bromide;C21H20N3Br;分子量为394.32)含有一个可以嵌入DNA 碱基的三环平面基团。它与DNA 的结合没有碱基序列特异性。大约每2.5 个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后,紫外激发后呈现荧光,可以检测到10ng 的DNA 条带。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
EB染色液 | EB staining solution | 10ml |
使用方法:
使用,先离心快甩EB溶液至管底,以防开盖后EB造成的污染。
琼脂糖电泳凝胶的制备及染色(预染法):
1. 按照所需浓度称取琼脂糖,加入TAE或TBE缓冲液,在微波炉中加热至彻底溶解。
2. 等凝胶温度降至大约50-60℃以下时,加入10 mg/ml EB溶液至终浓度为0.5μg/ml (如100ml凝胶加入EB量为5μl);彻底摇匀后铺胶并插入梳子。
3. 凝固后,将梳子轻轻拔出。
4. 上样电泳,电泳结束后紫外观察。
琼脂糖电泳凝胶的制备及染色(后染法):
1. 按照所需浓度称取琼脂糖,加入TAE或TBE缓冲液,在微波炉中加热至彻底溶解。
2. 等凝胶温度降至大约50-60℃以下时,不要加入EB溶液,直接铺胶并插入梳子。
3. 凝固后,将梳子轻轻拔出。
4. 上样电泳。
5. 电泳结束后将凝胶浸泡在含有EB的TAE或TBE染色液中(染色液配制:100ml 缓冲液中加入150-200μl EB溶液,混匀)染色15-20分钟;TAE或TBE缓冲液中脱色10-15分钟。
6. 紫外观察结果。
储存条件:室温避光。
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
Mayor`s苏木素 20ml
核固红 12ml
DAPI染色液 50ml
免疫组化用苏木素染色液 50ml×1
免疫组化用伊红染色液 50ml×1
大鼠肌球蛋白重链7(MYH7)elisa检测试剂盒
大鼠肌球蛋白重链6(MYH6)elisa检测试剂盒
大鼠肌球蛋白重链2(MYH2)elisa检测试剂盒
大鼠肌球蛋白重链1(MYH1)elisa检测试剂盒
大鼠肌球蛋白轻链激酶(MYLK)elisa检测试剂盒
EB染色液牛卵泡抑素(FS)elisa检测试剂盒
牛列腺素E2(PGE2)elisa检测试剂盒
牛肉碱棕榈酰转移酶-II(CPT-II)elisa分析检测试剂盒
牛乳过氧化物酶(LPO)elisa分析检测试剂盒
牛乳酸脱氢酶(LDH)elisa分析检测试剂盒
更新时间:2024/4/16 10:41:12
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