详细内容
琼脂糖(Agarose)是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体,提取自琼脂或者含琼脂的海藻,结构上是一种线性聚合物,由β-D-吡喃半乳糖(1-4)连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基构成。作为一种凝胶试剂,常用于通过凝胶电泳或者印迹法(如Northern或Southern)来进行日常核酸分析,也适用于蛋白应用,如辐射状免疫扩散(RID)实验。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
低熔点琼脂糖 | Low Melting Point Agarose | 5g|25g|100g |
琼脂糖的基本参数,包括:1)硫酸盐含量,琼脂糖的纯度指标;2)凝胶强度,指施加于凝胶使之断裂的外力;3)胶凝点,指水溶性琼脂糖溶液冷却后形成凝胶时的温度;4)电渗(EEO),一种液体穿透凝胶的一种电动运动,会干扰分离效率。
低熔点琼脂糖(Low melting point agarose)是经过改良使得成胶温度和熔点更低的琼脂糖,相比于常规琼脂糖,分子筛特性更好,条带清晰度更高。非常适用于小分子量核酸的分离以及电泳后核酸片段的回收(因其约在65.5℃熔化,几乎低于所有核酸分子的熔点)。低熔点琼脂糖凝胶电泳纯化回收的DNA胶条重熔后,可以直接用于制备放射性同位素标记的DNA探针。本品在37℃以下保持流动,适用于凝胶内的酶促反应、组织培养、细胞的克隆和病毒空斑实验等。
储存条件:常温。
H2S含量测试盒
H2S含量测试盒
NO含量测试盒
NO含量测试盒
环磷酸腺苷(cAMP)含量测试盒
大鼠活化素A受体抗体IgM(ACV-RAb IgM)elisa检测试剂盒
大鼠活化素A受体抗体(ACV-RAb)elisa检测试剂盒
大鼠活化素A(ACV-A)elisa检测试剂盒
大鼠活化凝血因子X(FXa)elisa检测试剂盒
大鼠活化蛋白C(APC)elisa检测试剂盒
低熔点琼脂糖牛Ⅲ型胶原氨基末端肽(PⅢNP)elisa检测试剂盒
牛C反应蛋白(CRP)elisa检测试剂盒
牛C肽(C-Peptide)elisa检测试剂盒
牛D-乳酸elisa检测试剂盒
牛ELISAelisa检测试剂盒
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2024/4/1 11:22:48
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