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点击次数:1018 发布时间:2022/3/2 8:54:01
2×RNA上样缓冲液用于琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺琼脂糖凝胶电泳RNA 样本的处理。缓冲液组分经过优化,其中包括指示剂溴酚蓝和二甲苯青FF,电泳时可肉眼监控RNA 的迁移,并含有甲酰胺用作一种变性剂和RNA稳定剂。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
2×RNA上样缓冲液(不含溴化乙锭) | 2×RNA Loading Buffer(Without Ethidium Bromide) | 5×1ml |
1×RNA loading buffer各组分:47.5% Formamide, 0.01%(w/v)SDS, 0.01%(w/v) Bromphenol Blue, 0.005%(w/v) Xylene Cyanol, 0.5mM EDTA.
使用方法
1)将RNA样品与等体积的2×RNA上样缓冲液充分混匀。
2)对于变性PAGE(尿素)/Agarose凝胶电泳,需在65-70℃加热5-10min变性RNA,并在加热的同时用枪头吸取电泳缓冲液小心冲洗点样孔中多余的尿素;对于非变性PAGE/Agarose凝胶电泳则无需此步加热,直接进行下一步。
3)上样即可。
保存:室温可稳定保存1周,4 oC可保存1个月,-20 oC可稳定保存2年。
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
FDA水解酶测试盒
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土壤铵态氮测试盒
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土壤硝态氮测试盒
大鼠活化素A(ACV-A)elisa检测试剂盒
大鼠活化凝血因子X(FXa)elisa检测试剂盒
大鼠活化蛋白C(APC)elisa检测试剂盒
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2×RNA上样缓冲液(不含溴化乙锭)脲酶(UE)测试盒
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柠檬酸CA含量测试盒 50T/48样 比色法
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柠檬酸合成酶CS活性测试盒 20T 50T 比色法
更新时间:2024/4/17 11:07:12
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