高分辨率琼脂糖(PCR)

详细内容

产品属性：

中文名称：高分辨率琼脂糖(PCR)
英文名称：High Sieving Agarose

产品规格：5g|25g|100g

琼脂糖（Agarose）是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体，提取自琼脂或者含琼脂的海藻，结构上是一种线性聚合物，由β-D-吡喃半乳糖（1-4）连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基构成。作为一种凝胶试剂，常用于通过凝胶电泳或者印迹法（如Northern或Southern）来进行日常核酸分析，也适用于蛋白应用，如辐射状免疫扩散（RID）实验。

本品为PCR高分辨率琼脂糖，对PCR产物、小片段DNA具有较高的分辨率，适宜分离20b
2）很低的背景；

3）品质稳定等。

使用方法

1）配制适量电泳及制胶用的缓冲液（根据电泳需要，配制合适浓度的电泳及制胶缓冲液），倒入合适三角瓶中。【注意】：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。

2）根据制胶量及凝胶浓度，加入准确称量的琼脂糖粉（总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量）。

3）在微波炉中加热溶解琼脂糖，设置中火加热至沸腾，保持胶液沸腾约 30s，戴上防热手套，移开三角锥瓶，小心摇动三角锥瓶，重悬未溶解颗粒，再次用高火加热1分钟（或加热直至琼脂糖完全溶解）。请戴上防热手套，小心摇动三角锥瓶，使琼脂糖胶液充分均匀。

【注意】：必须保证琼脂糖充分完全溶解，此时琼脂糖胶液清澈，否则，会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡，停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。

4）使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴化乙锭(EB)溶液使其终浓度为0.5μg/ml，并充分混匀。

【注意】：溴化乙锭是一种致癌物质。使用含有溴化乙锭的溶液时，请戴用手套。建议使用我司提供的EB无毒替代品（YeaRed 核酸染料，Cat# 10202），使用时仅需用制胶缓冲液稀释至1×工作液即可。

5）将琼脂糖溶液倒入制胶模具中，在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3-5mm之间。

6）在室温下使胶凝固（大约30min-1h），然后放置于电泳槽中进行电泳。

【注意】：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存，一般可保存 2～5天。

操作流程：

1.根据要保存的各样本的体积，计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍（如100mg组织约用1ml RNAwait）；离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。

2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中；

3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状，立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入，组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织（如大鼠的肾脏、脾脏，小鼠的大部分器官）取下后可以直接浸入RNAwait。

4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜（4℃过夜是必需的，这样可使RNAwait完全渗入到组织中），然后转移到-20℃冰箱（RNAwait在-20℃时仍为液态，有结晶析出，是正常情况）；或者在4℃冰箱过夜后，从RNAwait中取出组织块，转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本，反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
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更新时间：2024/1/19 9:52:04

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