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点击次数:1124 发布时间:2022/3/2 8:48:01
本产品是用生物素标记的lambda/Hind Ⅲ DNA Marker,可以用做Southern杂交的Marker,便于准确确定杂交片段的大小。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
Southern用DNA Marker(生物素标记) | Southern DNA Marker(Labeled by Biotin) | 20次 |
产品特点:
1. 即开即用,非常方便。
2. 每个DNA片段显色强度均匀。
3. 如果探针用生物素标记,则必须用生物素标记的DNA Marker。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
Bradford法蛋白检测试剂盒 100T/96样
DTT1M 100ul
PMSF100mM 1ml
抗体孵育膜 100张/包
六、免疫组化整体解决方案——IHC相关
大鼠黑色素细胞抗体(MC Ab)elisa检测试剂盒
大鼠核转录因子κBP65(NFκBp65)elisa检测试剂盒
大鼠核转录因子κB(NFκB)elisa检测试剂盒
大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)elisa检测试剂盒
大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)elisa检测试剂盒
Southern用DNA Marker(生物素标记)绵羊甲状腺素(T4)elisa分析检测试剂盒
棉子糖含量测试盒
棉籽糖含量测试盒
免疫球蛋白IgA试剂盒 R1:45ml×1 R2:15ml×1 免疫浊度法
免疫球蛋白IgG试剂盒 R1:45ml×1 R2:15ml×1 免疫浊度法
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
更新时间:2024/4/11 9:52:04
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