详细内容
本品是一种经去RNase处理的,能有效地促进微量RNA沉淀回收的大分子聚合物,适用于提取样品中的微量RNA。
产品名称 | 英文名称 | 规格 |
微量RNA助沉剂 | RNApp RNA precipitation aid | 0.5mL |
产品特点:
1.促进微量RNA的沉淀,其沉淀条件跟常规乙醇或异丙醇RNA沉淀相同,故可直接加入到样品中促进微量RNA的沉淀和回收。
2.使用多样,可以在核酸提取的任何步骤中加入,既可以加到提取液中,也可以加到稀释的RNA样品中。
3.化学惰性,不影响核酸的A260/280光吸收,不影响后续的反应过程(如cDNA 合成RT-PCR和体外转录等)。
4.不含RNase,产品溶解在液相RNase Scavenger中,检测不到残留的RNase。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一:用于提取微量组织样品中的RNA(推荐用法)
加入裂解液中使用:按10-20μL RNApp/mL 裂解液的比例将RNApp加入常用RNA提取液(如TRIzol,动物RNA提取试剂盒)中,然后按相应的操作规程直接提取RNA。如果裂解液中含有CTAB,则需要在后醇沉淀时加入,后续处理不变。
二:用于沉淀回收反应体系中的微量RNA
直接将5-10μL RNApp 加入待沉淀的RNA溶液中,然后按盐/乙醇或盐/异丙醇沉淀RNA的经典操作规程沉淀RNA。
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
Annexin V-FITC / 7-AAD 双染细胞凋亡检测试剂盒50T
Annexin V-FITC / 7-AAD 双染细胞凋亡检测试剂盒100T
Annexin V-FITC / 7-AAD 双染细胞凋亡检测试剂盒20T
细胞膜电位检测试剂盒50T
细胞膜电位检测试剂盒100T
大鼠核糖核酸酶T2(RNASET2)elisa检测试剂盒
大鼠核糖核酸酶H(RNASEH)elisa检测试剂盒
大鼠核糖核酸酶A3(RNASE3)elisa检测试剂盒
大鼠核受体亚家族3C组成员1(NR3C1)elisa检测试剂盒
大鼠核受体亚家族1D组成员2(NR1D2)elisa检测试剂盒
微量RNA助沉剂绵羊补体片段3a(C3a)elisa分析检测试剂盒
绵羊补体片段3a(C3a)elisa检测试剂盒
绵羊补体片段3b受体(C3bR)elisa分析检测试剂盒
绵羊补体片段3b受体(C3bR)elisa检测试剂盒免费代测
绵羊成纤维细胞生长因子23(FGF23)elisa分析检测试剂盒
更新时间:2024/3/22 9:53:16
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