溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线，其跟模板（或其浓度）没有关系，扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线，类似于电泳。那么你扩增几种基因就应该有几种对应的峰（一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间），我说的是一般情况，这个跟扩增片段长短有关系。我们实验室用BIOGHC Elitefast SYBR Kit检测DNA,熔解曲线是为了验证扩增产物特异性的，要是熔解曲线是单峰说明产物只有一条，结果较好;出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体（一般为60~75℃之间）视引物长度而定，而基因组DNA污染的峰会在90℃以后。出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因（也有可能是从加完反应液到上机开始PCR这之间的时间过长）所致；基因组DNA那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gDNA的消除工作。而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染，注意实验操作等避免模板污染。
先看目的基因熔解曲线,如果只有一个尖锐的锋,而且不是很低温度下出来的(那时Dimer),说明这对引物可以用,这时看Ct值才有意义.
标准扩增曲线看Ct值得间隔是否均匀,一般10倍稀释间隔3.3个ct值,同时要保证你的目的基因的Ct值落在你的标准曲线内,这个标曲才是合格的.根据标曲可以推算出扩增效率.目的基因的扩增曲线要看起起飞时间,保证Ct值在20几比较好,30个以后就不好说了,要有水样作对照,水样起飞前(有时)的扩增才是有意义的.
