都说是封闭，羊血清究竟封闭的是什么（抗原？）那接下来加一抗怎么又能反应结合？不是封闭了吗？

 

     封闭的目的是为了减少非特异染色。

 

     这里，允许小编介绍下免疫组化中封闭血清的原理，封闭血清的原理主要有两点：

 

      是待检样本会非特异性的和蛋白结合，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。

 

      第二是待检样本中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。BSA则无法封闭Fc受体。

 

     所以二抗来源的动物血清封闭的是组织上带电荷基团。因为组织中非抗原抗体反应出现的非特异性背景染色，*常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。这并不影响接下来一抗的结合，因为这种结合是特异的，亲和力远远高于因电荷作用的结合，因此会竞争胜出。

 

     免疫组化中用血清封闭的较多。封闭血清一般选择和二抗同一来源的（如一抗为兔来源多抗，二抗为山羊抗兔IgG，那封闭液就用山羊血清），血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。但要注意封闭用血清中不能含有目标蛋白，且与一抗来源不同。另外二抗因尽量少选取兔子或老鼠来源的，因为这两个在亲缘关系上和人类非常接近，所以产生交叉反应的机会就比较大，从而导致背景比较高。!适合选用来源于驴，山羊，绵羊等的二抗，背景相对就很低。