1)标本的采取和保存:可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本;

 

2)试剂的准备:所需试剂、蒸馏水、去离子水、自配的缓冲液;

 

3)加样:一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。

 

4)保温:ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育。

 

5)洗涤:洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外,手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种。

 

6)显色和比色:显色是ELISA中的*一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。比色应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体,然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。仪器准备为酶标仪。

 

7)结果判断:分定性判定和定量判定。