大鼠嗅球中星形胶质细胞 实验操作步骤:1动物断头处死后,暴露嗅球,无菌条件下摘取双侧嗅球,弃除软脑膜,在镜下仔细剥取嗅神经纤维层及嗅小球层。将取得的组织剪成约1mm3大小,用D-hanks液清洗2次后,0.125%胰蛋白酶37℃分离消化25min,然后浸入含有20%血清的培养液中终止消化8min,吸出组织,用无血清的DF12培养基清洗1次。*后依照总论的方法用含20%胎牛血清的DF12培养基将其制成单细胞悬液。
2.将吹打好的单细胞悬液置于未经处理的培养瓶中,37℃,5%CO2孵箱中培养18h后,将未贴壁的细胞悬液转种于另一未经包被处理的培养皿中,37℃,5%CO2继续培养36h后重复以上操作,*后将未贴壁细胞按照合适的密度接种于经25µg/ml多聚赖氨酸包被的培养器皿中。
3.前3d按1/3量换液,以后每隔2d 1/2量换液(含10%胎牛血清的DF12培养液),37℃,5%CO2培养5-10d。嗅鞘细胞在接种24h后大部分已经贴壁,呈不规则颗粒样,胞体折光性较差。培养3d,偶有胞体呈现锥形或纺锤形的细胞,发出短小突起,可见蹼状生长的锥样结构,细胞周围碎片物质减少(图I-7A)。常规培养5d,大部分细胞胞体呈扁平样,胞浆向外延伸,发出短小、蹼状突起。10d后少数为多极星形胶质细胞样,大部分细胞呈双极、三极施万细胞样,胞体立体感强,伸出长而纤细、柔软的突起彼此交织成网络状(图l-7B、C)。另有一些细胞胞体较大,扁平样,边缘不规则,立体感较差。
其它说明
1由于成年大鼠嗅球中星形胶质细胞成分较少,且在此培养条件下难以存活,因此笔者通常选用单次差速贴壁,即单细胞悬液置于未经处理的培养瓶中培养18-24h,去除主要污染成纤维细胞后便可获得既有较高产率又保持较高纯度的嗅鞘细胞。
2.体外培养的嗅鞘细胞形态因供体动物年龄、取材部位和培养条件的不同而有所差异。同时笔者观察到,成年小鼠的嗅球嗅鞘细胞胞体较大鼠的略小,大鼠嗅鞘细胞发出的突起粗大、平直,而小鼠的则纤细、柔软,提示这可能与种属差异也有关。
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