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脂质体转染是综合比较起来不错的一个方法
阅读次数:1154 发布时间:2019/6/19 14:44:31
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          大家都知道,细胞是由带负电荷的磷脂双分子层构成,这对大分子物质来说是个不可透过的屏障,比如DNA和RNA的磷酸骨架,为了使核酸穿过细胞膜,开发了多种技术,大致可分为物理介导、化学介导和生物介导。
几种常见的转染方法:
 
  1、脂质体转染法
 
  阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用,将DNA分子包裹入内,形成DNA脂复合物,也能被表面带负电的细胞膜吸附,再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前实验室*方便的转染方法,其转染率较高,优于磷酸钙法。
 
  2、磷酸钙共沉淀法
 
  该方法可重复性差,而且磷酸钙溶液对温度、pH和缓冲盐浓度的变化十分敏感,对细胞尤其是原代细胞毒性较大,也不能采用RPMI培养基,因为其含有高浓度的磷酸盐。
 
  3、电穿孔转染法
 
  电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的小孔促使DNA分子进入胞内,这种方法就是电穿孔。
当遇到某些脂质体转染效率很低或几乎无法转入时可以用电穿孔法转染。
一般情况下,高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂,可以大大的降低细胞的死亡率,同时提高电穿孔转染效率。
 
  4、病毒感染
 
  对于脂质体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系可以采用病毒感染,腺病毒,腺相关病毒,逆转录病毒和慢病毒载体已广泛用于哺乳动物细胞体内外的基因转染,转染效率比较高,适用于较难转染的细胞。
但是插入的片段长度有一定限制,*重要的是技术难度比较高,在一般实验室中很难普及,而且某些病毒起效时间比较慢,跟不上细胞这种快速繁殖的速度,如果只是做简单细胞系的转染性价比不高。
 
  没有一种方法适用于所有的细胞和实验,理想的方法应根据细胞类型和实验需要进行选择,如果只是在细胞水平做,而且用的是简单细胞系,那么脂质体转染是综合比较起来不错的一个方法。

原创作者:上海谷研实业有限公司

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