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转甲状腺素蛋白(PALB)重组蛋白兔使用说明
阅读次数:2441 发布时间:2023/3/16 15:32:00
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 转甲状腺素蛋白(PALB)重组蛋白兔使用说明:
 
如发现RIPA有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
 
根据使用量,取每1ml RIPA 加入10ul PMSF,使PMSF的终浓度为1mM。混匀备用 (PMSF现用现加)。
 
1、样品处理:
 
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
 
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
 
c)对于组织样品: 把成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。
 
用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
 
2、后处理:将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
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