5×非变性非还原蛋白上样缓冲液注意事项:1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
二磷酸3核苷酸酶抗体
脑蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶29抗体
智力发育调节相关蛋白BRWD3抗体
生物素酶抗体
Bax相互作用因子1抗体
表皮生长因子反应蛋白2抗体
BCL2相关X蛋白抗体
Bcl2样凋亡蛋白13抗体
Bcl2样凋亡蛋白14抗体
Bcl2蛋白修饰因子抗体
骨形态发生蛋白11抗体
BCL2样15促凋亡蛋白抗体
骨碱性磷酸酶抗体
磷酸化T淋巴细胞连接蛋白抗体
磷酸化T淋巴细胞连接蛋白抗体
脑纳素体抗体
脑纳素体抗体
骨髓基质干细胞抗原1抗体
磷酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗体
磷酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗体
磷酸化相关死亡促进因子抗体
磷酸化细胞死亡调解子抗体
磷酸化细胞死亡调解子抗体
Bcl-2结合抑凋亡蛋白2抗体
β淀粉样肽1-42抗体
磷酸化内收蛋白抗体
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