人晶状体上皮细胞操作步骤:
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
柴胡皂苷DSaikosaponian D20874-52-6
蟾毒灵Bufalin68403-26-8
长春质碱Catharanthine2468-21-5
常春藤皂苷元Hederagenin465-99-6
朝藿定AEpimedin A110623-72-8
朝藿定A1Epimedin A1
朝藿定BEpimedin B110623-73-9
朝藿定CEpmedin C110642-44-9
橙黄决明素Aurantio-obtusin67979-25-3
橙皮苷Hesperidin520-26-3
橙皮素Hesperitin520-33-2
虫草素Cordycepin73-03-0
川陈皮素Nobiletin478-01-3
川楝素Toosendanin58812-37-6
川芎嗪Tetramethylpyrazine1124-11-4
川续断皂苷VIAsperosaponin Ⅵ39524-08-8
川续断皂苷乙Dipsacoside B33289-85-9
穿心莲内酯Andrographolide5508-58-7
次乌头原碱
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